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NadGreen plus核酸染料图片
产品货号:
YTB0136
中文名称:
NadGreen plus核酸染料
英文名称:
Nucleic Acid Green Plus
产品规格:
1mL|5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是一种NadGreen、溴化乙锭(EB)的升级换代产品,用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色。NadGreen具有安全(未检测到致突变性和细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点,凝胶中的核酸在使用本制品后经约500nm波长蓝光(也可以使用约260nm紫外光,但紫外成像条带相对较暗)激发呈现绿色荧光,适用于原先使用SYBR Green或SYBR Gold为核酸染料的凝胶成像和检测系统。NadGreen Plus是NadGreen的增强版,相对于NadGreen,使用方法完全一致,但条带更清晰、更均匀、背景更低,大大降低条带的拖尾和弯曲,而且对条带迁移几乎没有影响,即使上样量很高,也可获得良好的条带分离效果。


由于NadGreen Plus在500nm左右处有最大的激发波长,可以使用对人体无害的蓝光灯或蓝光成像仪进行核酸检测,从而避免常规的紫外检测对核酸样品的致突变性,以及紫外对人的眼睛和皮肤的伤害。特别在切胶回收时,使用NadGreen Plus并用蓝光灯具有很大的优势,不仅可以避免核酸样品的突变,也可以避免紫外光对人体的伤害。




  • NadGreen Plus比EB或SYBR Green更安全。
    NadGreen Plus在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。微型艾姆斯氏试验(Mini-Ames test)结果表明,即使在S9代谢活化时,也没有检测到致突变性。NadGreen Plus、NadGreen和百奥莱博另外一种安全型核酸染料NadRed,由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞,从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜,进入活细胞并染色DNA。并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。
  • NadGreen Plus检测灵敏度高,对于小分子量核酸的染色效果好。
    NadGreen Plus最低可检测1ng的DNA样品,在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳,尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。在使用浸泡染色法时,NadGreen Plus和SYBR Gold的灵敏度相近甚至更高;与SYBR Gold不同的是,NadGreen Plus预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度。EB对于小分子量核酸染色效果差,而NadGreen Plus对于小分子量核酸的染色效果很好,便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段。本说明书推荐使用的NadGreen Plus浓度,其检测效果略优于EB。如果希望获得更高的染色灵敏度,可以适当提高NadGreen Plus的工作浓度。
  • NadGreen Plus的稳定性好,染色重复性高。
    含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差,这通常是由于SYBR系列染料的稳定性差导致的。而NadGreen Plus的稳定性很好,可以室温长时间保存及使用微波炉加热。NadGreen Plus的光稳定性良好,可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性,含NadGreen Plus的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。
  • NadGreen Plus可以使用和NadGreen、SYBR Green或EB相同的检测体系。
    NadGreen Plus具有和NadGreen、SYBR Green或SYBR Gold几乎相同的光学性质,激发光和发射光都非常接近,这样可以直接用NadGreen Plus替换NadGreen或SYBR Green,以使用NadGreen或SYBR Green的凝胶观察、拍照或成像系统(约500nm激发)。对于原来用于EB染料观察的系统,可以考虑选用百奥莱博的NadRed染料来替代EB,但也可以使用没有致突变性的NadGreen Plus来替代EB。使用NadGreen Plus来替代EB,并且用EB的紫外检测体系时,检测灵敏度会比使用NadRed低约4~5倍。对于既可以观察EB也可以观察NadGreen或SYBR Green的具有紫外和蓝光两种激发光的凝胶成像系统,则推荐直接用NadGreen Plus来替换EB。NadGreen Plus的激发光谱和发射光谱请参考图1。
    NadGreen plus核酸染料
    图1.NadGreen Plus的激发光谱和发射光谱
  • NadGreen Plus的使用方法和NadGreen、EB一致。
    NadGreen Plus可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶,也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便,而后者灵敏度要更加高一些。但由于NadGreen Plus本身已经非常灵敏,通常采用把NadGreen Plus直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊的情况,如核酸样品量特别少的情况等,则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。
  • NadGreen Plus对条带迁移几乎没有影响。
    使用NadGreen Plus时,样品的上样量不影响条带美观,即使上样量很高,也可获得良好的条带分离效果。
  • NadGreen Plus可大大降低条带的拖尾和弯曲,条带更清晰、更均匀、背景更低。
    NadGreen存在一定程度的条带拖尾、弯曲、背景高等现象,NadGreen Plus基本解决了这些问题,而且分子量大的条带也可得到完美的分离效果。
  • NadGreen Plus染料易去除
    通过凝胶回收试剂盒或酚氯仿抽提,可以有效去除与DNA或RNA结合的NadGreen Plus,从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。



组分1mL5mL
2000×NadGreen Plus1mL5mL
说明书1份1份

保存:室温,有效期2年。


  • 为确保使用的不是假冒的NadGreen Plus,可以用细胞培养液把NadGreen Plus稀释至1X,然后对培养的活细胞进行染色。随后在荧光显微镜下尝试用各种激发光观察,如果发现活细胞细胞核出现明显的荧光,则可以判定为假冒产品。如果各种激发光下活细胞均无荧光,则说明该核酸染料是不能进入活细胞的相对安全的染料。具有强致突变性的吖啶橙(Acridine Orange)染色核酸后也呈现绿色荧光,但其可以染色活细胞,而NadGreen Plus不会染色活细胞。
  • 使用蓝光灯来检测NadGreen Plus染色的核酸胶时,需要注意避免使用一些实为紫外灯的假冒伪劣的蓝光灯,以减少紫外线对于核酸样品和人体的伤害。比较简单的判断方法是,对于EB或NadRed染色的核酸胶,蓝光灯照射后是不会出现荧光条带的,而仅对于NadGreen Plus染色的核酸胶,蓝光灯照射后才会出现荧光条带。如果对于EB或NadRed染色的核酸胶照射后也能观察到荧光条带,则说明使用的蓝光灯实际为紫外灯。
  • 琼脂糖凝胶中添加NadGreen Plus制备的凝胶为浅橘红色,电泳后肉眼观察胶颜色可能出现不均一的情况,例如上半部分胶颜色深,下半部分胶颜色浅,这属于正常现象,不影响电泳结果。
  • 制备好的NadGreen Plus琼脂糖凝胶,在4℃避光条件下通常可以保存3~5天。
  • NadGreen Plus琼脂糖凝胶再次熔化使用时,为取得更好的观察效果,需要添加适量NadGreen Plus。
  • 电泳之后的凝胶不建议重复使用。
  • 电泳后再使用NadGreen Plus染色的凝胶一般不需要脱色,如果发现背景太高,可以使用不含核酸酶的水进行脱色处理。
  • NadGreen Plus和NadGreen、NadRed一样除了可以染色双链DNA外,也可染色单链DNA和RNA。NadRed对单链核酸的染色灵敏度约为对双链DNA染色灵敏度的一半。NadRed对单链核酸的染色灵敏度约为NadGreen Plus的5倍。
  • 如果使用聚丙烯酰胺凝胶,请使用浸泡染色法染胶,并延长染色时间至30分钟~1小时。
  • 如果观察到条带弥散或者分离不理想,建议使用浸泡染色法染色以确认是否与染料有关。如果浸泡染色法染色后仍然出现类似的问题,说明与染料无关,请尝试以下方法:使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低染料的浓度、降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等。
  • 本制品兼容常用的电泳缓冲液,例如TAE和TBE。
  • NadGreen Plus适用于约500nm或260nm激发的成像系统,如果使用普通的适用于NadRed或EB的紫外灯或成像系统(约300nm激发),也能较好地观察到荧光,但强度会略弱一些。
  • NadGreen Plus不属于有毒有害物质,并通过了环境安全相关测试,相关废弃物无需特殊处理,可参考常规化学试剂进行处理。



NadGreen Plus和EB (溴化乙锭)一样可以根据使用者的偏好或实验目的采用以下方法中的一种。
  • 琼脂糖凝胶中添加NadGreen Plus。
    根据需要配制适当浓度(例如1~3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完全融解后,适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时,按照每100mL胶液加入50μL NadGreen Plus的比例(2000:1)加入NadGreen Plus。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适当量的DNA或RNA在该胶中电泳后,用约500nm波长蓝光激发或相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统),就可以观察到明亮的核酸条带。
    说明:NadGreen Plus非常稳定,所以NadGreen Plus可以像EB一样在琼脂糖凝胶液加热融解后但未凝固前加入并混匀,也可以在琼脂糖融解前加入然后再微波炉加热融解并混匀。
  • 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色。
    按照每100mL 100mM NaCl溶液或水中加入100~200μL NadGreen Plus的比例(500-1000:1)加入NadGreen Plus,配制成NadGreen Plus染色液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中,加入适量上述配制好的NadGreen Plus染色液,确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(30~50rpm)染色20~30分钟。染色的时间根据胶的厚度而定,胶厚则染色时间需要长一些,胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后,在紫外灯下即可观察核酸条带。要观察到更为清晰的条带,可以在染色后用水漂洗1~2次,每次3~5分钟,以消除背景,然后用约500nm波长蓝光激发或相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统)。NadGreen Plus染色液可以重复使用3次左右。NadGreen Plus染色液也可以一次大量制备,在室温下避光保存,直至用完。对于核酸需要回收的情况,操作过程中需要注意避免核酸酶污染。

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